Efeitos da membrana amniótica e Geléia de Wharton descelularizadas e das nanopartículas de ouro com curcumina em modelo animal de ferida crônica

Abstract

A pele é considerada o maior órgão do corpo humano em peso, sua principal função é a de barreira a fim de proteger o interior estéril do corpo do ambiente exterior visando a sobrevivência, além disso, a pele é responsável por atividades metabólicas, catabólicas e de condução de estímulos sensoriais. Ferida é toda e qualquer interrupção da continuidade da pele, seja ela causada por meios físicos, químicos ou biológicos, devido a sua vulnerabilidade a pele adquiriu ao longo do tempo um avançado mecanismo de reparo, denominado cicatrização. Neste contexto a membrana amniótica (MA) e a geléia de Wharton (GW) descelularizadas são materiais ricos componentes matriz extracelular (MEC) incluindo diversos tipos de colágeno, fibrina e fatores de crescimento, fornecendo um “andaime” muito propício para a migração, proliferação e diferenciação celular, processos estes necessários ao desenvolvimento do reparo tecidual, além de serem altamente anti-inflamatórias, antioxidantes e antimicrobianas. As nanopartículas de ouro biossíntetizadas com curcumina (GNPs) são comprovadamente potentes moléculas anti-inflamatórias e antioxidantes e se somam em sinergia à MA e GW favorecendo e acelerando a cicatrização de feridas. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do tratamento com MA, GW e GNPs isolados e combinados em modelo experimental de ferida crônica em ratos Wistar. Foram utilizados 72 ratos Wistar distribuídos randomicamente em 6 grupos experimentais (n=12): I. Ferida Crônica sem tratamento (FC); II. FC + tratamento com MA (FC + MA); III. FC + tratamento com GW (FC + GW); IV. FC + tratamento com GNPs (FC + GNPs); V. FC + tratamento com MA + GNPs (FC + MA + GNPs); VI. FC + tratamento com GW + GNPs (FC + GW + GNPs). Os animais foram anestesiados com Isoflurano 4% para indução da ferida através de um corte circular de espessura total da pele de 2cm de diâmetro, a cronificação da ferida foi induzida aplicando topicamente por 6 dias iniciando no dia da indução da ferida. Os tratamentos com MA, GW (aplicação única) e GNPs (aplicação diária por 5 dias) foram iniciados no 4º dia após a última aplicação de Resiquimod. No 15º dia após a indução da ferida foi realizada a análise macroscópica e do tamanho da ferida, após, os animais foram eutanasiados e retirados os tecidos (pele/ferida) para as análises histológicas, bioquímicas e moleculares. Os resultados demonstraram que ambos os tratamentos isolados e combinados tiveram diferença significativa para o aumento da contração da ferida em relação ao grupo controle, diminuindo o tempo total de cicatrização, os tratamentos propostos também foram eficazes em diminuir a infiltração de células inflamatórias na ferida, reduzindo os níveis de citocinas pró-inflamatórias como IL1-β e IL6 TNF-α, e aumentando consideravelmente os níveis das citocinas anti-inflamatórias IL10 e IL4 e do TGF-β. No tocante aos parâmetros oxidativos, nossos resultados demonstram que os tratamentos foram eficazes em reduzir DCF e Nitrito, e todos melhoraram notadamente a atividade do sistema antioxidante SOD e GSH. Na análise da expressão gênica, houve aumento significativo na expressão de COL III nos grupos tratados com GW e GNPs isoladas e no grupo tratado com MA + GNPs, houve aumento também da expressão genica de COL I nos grupos tratados com GNPs e MA + GNPs. Concluímos que os tratamentos com MA, GW e GNPs em ferida crônica são eficazes para controlar e atenuar o processo inflamatório e melhorar as fases proliferativa e de remodelação, favorecendo a formação do tecido de granulação, da MEC e a cicatrização completa e rápida da ferida.