Ação neuroprotetora da minociclina em diferentes modelos experimentais de lesão de isquemia e reperfusão cerebral

Abstract

Lesões de hipóxia cerebral, tanto global quanto focal apresentam fisiopatologia de lesão de isquemia e reperfusão tecidual, caracterizada pela excitotoxicidade, ativação microglial e neuroinflamação. Estudos envolvendo a minociclina revelam um efeito secundário neuroprotetor importante, agindo sobre mecanismos inflamatórios, entre eles o bloqueio da ativação microglial, por isto, é visada como fármaco potencial em tratamento de lesões de isquemia e reperfusão (I/R). Estudos com modelos alternativos de lesão de hipóxia cerebral podem apresentar contribuições importantes para o entendimento da patologia, além de novos dados e confirmações de resultados presentes na literatura. Com isso, o objetivo deste trabalho é avaliar a ação da minociclina em diferentes modelos experimentais de lesão de I/R cerebral. Para tal, foi utilizado modelo in vitro com células microgliais de linhagem Bv-2, e modelo in vivo em peixe-zebra. Ambas as metodologias passaram por padronização de protocolo de hipóxia. Nos dois modelos utilizou-se os seguintes grupos: Controle; Controle + Minociclina; Hipóxia e Hipóxia + Minociclina. In vitro, em sequência ao protocolo de privação de oxigênio e glicose (POG), os grupos tratados receberam 50 μM de minociclina por 24h. Após as 24h as amostras foram retiradas para as análises neuroquímicas. Em peixe-zebra, foi realizada a indução da hipóxia seguido da administração de minociclina a 1mg/L por 1h. Após esse período foram realizados os experimentos comportamentais e neuroquímicos. In vitro pela técnica de MTT observou-se que a minociclina é capaz de reverter a redução de viabilidade celular induzida pela hipóxia, também foi capaz de diminuir a ativação de micróglias após POG, aumentando níveis de IL-10. Além disso, foi possível observar que a minociclina foi capaz de reverter o aumento dos índices de DCFH. O protocolo POG em Bv-2 padronizado no presente estudo reproduziu dados característicos da fisiopatologia de lesão I/R pós hipóxia em parâmetros de estresse oxidativo, níveis de glutamato e citocinas pró-inflamatórias. Em modelo in vivo pela técnica de TTC observou-se que a minociclina reverteu a redução da viabilidade celular induzida pela hipóxia, além de reverter a área de lesão isquêmica. A minociclina também se mostrou capaz de auxiliar na recuperação comportamental de parâmetros motores após hipóxia. O protocolo de hipóxia em peixe-zebra padronizado no presente estudo reproduziu dados característicos da fisiopatologia de lesão I/R em parâmetros de estresse oxidativo e níveis de glutamato. Com estes resultados conclui-se que modelos de cultura de células e de peixe-zebra são alternativas vantajosas, capazes de reproduzir a literatura e propor novas importantes perspectivas para pesquisas. E que a minociclina em dose única foi capaz de reverter os danos causados sobre a viabilidade celular em ambos os modelos. Além de reduzir a ativação microglial in vitro, e melhorar parâmetros comportamentais in vivo.